CRISPR/Cas9 原代細胞轉染，為什么越來越多實驗室選擇電轉染？

CRISPR/Cas9 技術的成熟，使基因編輯逐漸從模式細胞系走向原代細胞和臨床相關細胞模型。然而，在實際操作中，許多實驗人員很快會遇到一個現實問題：

CRISPR 體系本身并不難，難的是如何把它高效、溫和地送進原代細胞。

在這一背景下，電轉染逐漸成為原代細胞 CRISPR 實驗中的主流選擇之一。

一、CRISPR/Cas9 在原代細胞中的遞送難點

與常規細胞系相比，原代細胞在進行 CRISPR 編輯時往往面臨多重挑戰：

• 對外界刺激高度敏感

• 轉染后細胞存活率要求高

• 編輯效率需要穩定、可重復

• 遞送時間過長可能引發非特異效應

這些特點決定了：
?? CRISPR 在原代細胞中的遞送方式，往往比編輯工具本身更關鍵。

二、化學轉染在 CRISPR 原代細胞應用中的局限

脂質體等化學轉染方法在 CRISPR 實驗中仍被廣泛使用，但在原代細胞中常出現以下問題：

1. 遞送效率不穩定
   化學轉染依賴內吞過程，而原代細胞內吞活性有限，導致 Cas9 或核酸進入細胞比例偏低。

2. 細胞毒性難以控制
   為提高編輯效率而增加試劑用量，往往會顯著降低細胞存活率。

3. 作用時間過長
   質粒或核酸在細胞內持續表達，可能增加脫靶風險。

在對安全性和可控性要求更高的原代細胞實驗中，這些問題尤為突出。

三、電轉染在 CRISPR 原代細胞中的優勢

電轉染通過瞬時電場在細胞膜上形成短暫通道，使 Cas9 及其相關組分直接進入細胞質，從機制上規避了內吞限制。

在 CRISPR 原代細胞應用中，電轉染的優勢主要體現在：

• 遞送過程快速、直接

• 不依賴細胞內吞活性

• 對細胞類型的適應性更強

尤其在原代細胞、免疫細胞等難轉染模型中，其穩定性優勢更加明顯。

四、RNP 遞送方式與電轉染的協同優勢

近年來，越來越多實驗室采用 Cas9–sgRNA RNP（核糖核蛋白）復合物 進行 CRISPR 編輯，其優勢包括：

• Cas9 在細胞內作用時間短

• 脫靶風險相對降低

• 編輯過程更可控

而電轉染正好與 RNP 遞送方式高度匹配：

• 可實現瞬時、高效遞送

• 不需要轉錄和翻譯過程

• 有利于提高編輯效率與一致性

因此，在原代細胞 CRISPR 應用中，“RNP + 電轉染"正在成為主流技術路線。

五、微量電轉染技術的進一步優化

傳統電轉染在原代細胞中仍可能帶來一定損傷。為此，近年來出現的微量電轉染（Microporation）技術通過：

• 縮小轉染體積

• 優化電場均勻性

• 減少熱效應

在保證 CRISPR 編輯效率的同時，進一步提升了細胞存活率，使其更適合用于珍貴樣本和功能研究。

在這一技術路線下，部分新型臺式電轉染系統已被應用于原代細胞和免疫細胞的 CRISPR 實驗中，用于實現更加穩定、可重復的編輯效果。

六、聯系我們

在 CRISPR/Cas9 原代細胞研究中，遞送方式正在從“輔助手段"轉變為“關鍵環節"。
隨著對編輯效率、安全性和重復性要求的不斷提高，電轉染，尤其是基于微量電轉染理念的技術方案，正逐漸成為越來越多實驗室的選擇。

如需了解 CRISPR/Cas9 在原代細胞中的電轉染思路或相關技術方案，可聯系相關技術支持獲取進一步信息。