原代細胞轉染效率低？實驗中常被忽視的幾個關鍵原因

在基因編輯、細胞功能研究和轉化醫學實驗中，原代細胞轉染始終是一個繞不開的技術難點。
不少實驗人員都有類似經歷：
在常規細胞系中效果良好的轉染方案，一旦應用到原代細胞中，轉染效率明顯下降，甚至伴隨嚴重的細胞死亡。

那么，原代細胞轉染失敗的原因究竟在哪里？

一、原代細胞與常規細胞系的本質差異

與 HEK293、HeLa 等永生化細胞系相比，原代細胞通常具有以下特點：

• 內吞活性較低

• 對外界刺激高度敏感

• 對培養條件依賴性強

• 修復能力有限

這意味著：
?? 原代細胞并不“適合"依賴內吞機制的轉染方式。

二、脂質體轉染在原代細胞中的局限性

脂質體轉染在分子生物學實驗中應用廣泛，但其原理決定了它在原代細胞中的適用性有限：

1. 高度依賴內吞過程
   原代細胞內吞效率低，導致外源核酸進入細胞的比例本身就不高。

2. 細胞毒性難以避免
   即使轉染效率略有提升，也往往以細胞存活率顯著下降為代價。

3. 實驗重復性差
   不同批次細胞狀態的微小差異，都會放大轉染結果的波動。

因此，在原代細胞實驗中，脂質體轉染常常表現為“偶爾成功，但難以復現"。

三、電轉染是否是更合適的選擇？

電轉染通過瞬時電場作用，在細胞膜上形成短暫通道，使外源分子直接進入細胞內部，從理論上繞過了內吞過程。

但傳統電轉染方法也存在明顯問題：

• 電場分布不均

• 局部過強電擊

• 熱效應明顯

在原代細胞中，容易造成不可逆損傷。

四、微量電轉染技術的改進思路

近年來，一種基于**微量電轉染（Microporation）**的技術路線逐漸受到關注，其核心思路在于：

• 縮小轉染體積

• 構建更加均勻、可控的電場

• 減少細胞暴露在高能電擊中的時間

在這一思路下，一些新型臺式電轉染系統被用于原代細胞和免疫細胞研究中，并在轉染效率與細胞存活率之間取得更好的平衡。

五、聯系我們

原代細胞轉染并非簡單地“換一種試劑"就能解決，其本質是轉染機制與細胞生物學特性的匹配問題。
在越來越多高難度應用場景中，研究人員開始重新審視轉染方法本身，并探索更適合原代細胞特性的技術路徑。

如需了解原代細胞轉染相關的實驗思路或技術方案，可聯系相關技術支持。